第三期
關于液相色譜柱使用中的常見問題解答(二)
上一期的十問十答液相柱篇主要給大家總結了常見液相柱使用中的問題與解答。
本期小編繼續(xù)為大家講解的是關于特殊色譜柱使用上的常見問題。
Question 1. ShimNex HE SAX/SCX以及WP SAX/SCX色譜柱怎么活化?
1. 需要使用至少20倍柱體積的流動相平衡色譜柱。
2. 當流動相中緩沖鹽濃度較高時候,為了防止鹽在色譜柱或系統(tǒng)中析出,可使用20%的乙腈水溶液沖洗5倍以上柱體積作為緩沖,再過渡到流動相。
3. 因為SCX色譜柱鍵合的基團是磺酸基團,容易與醇類物質發(fā)生酯化反應,所以流動相應當避免醇的使用。
氰基柱既可以用在正相模式,又可以用于反相模式。考慮到色譜柱壽命,推薦使用過程中固定為其中一種模式。因色譜柱出廠時使用庚烷:乙酸乙酯=90:10進行質控,所以如需要使用反相模式,請先使用異丙醇等將柱內的溶劑進行充分置換后再用相應的流動相進行活化操作。
Question 3. C4 色譜柱怎么活化?
一般C4色譜柱的活化參照C18色譜柱,首次使用色譜柱前,應先用20倍柱體積以上的甲醇/乙腈充分活化。為確保數(shù)據(jù)的質量,分析前應使用至少 10 倍柱體積的流動相平衡色譜柱。 若流動相中緩沖鹽濃度較高, 為了防止鹽在色譜柱或系統(tǒng)中析出,應先使用與流動相構成比例相同或有機相比例較低的水溶液沖洗至少 5 倍柱體積,再過渡到流動相。
Question 4. ShimNex HE SAX/SCX以及WP SAX/SCX怎么沖洗?
硅膠基質的離子交換色譜柱一般流失比較嚴重,壽命一般不是很好。所以色譜柱的清洗維護非常重要。色譜柱的污染可能會導致峰形的變化、峰分裂、肩峰、柱效的變化或背壓增加等問題。請參考以下方法進行清洗:
Question 5. 硅膠基質色譜柱的保存有什么注意事項?
Question 6. 氨基酸分析儀中,使用的Amino Na/Li型色譜柱,色譜柱怎么活化?
在使用長期停止使用的色譜柱之前,用0.2M氫氧化鈉水溶液沖洗數(shù)小時。
Question 7. 氨基酸分析儀中,使用的Shim-pack Amino Na/Li型色譜柱,色譜柱臟了的時候怎么沖洗?
Question 8. 使用的Amino Na/Li型色譜柱,色譜柱怎么保存?
如果色譜柱超過半年不使用,建議使用以下流動相沖洗保存:
使用0.2M的氫氧化鈉(氫氧化鋰)水溶液清洗色譜柱,用0.01%的辛酸的10%乙醇溶液置換色譜柱,最后將色譜柱保存在陰暗地方。
Question 9. Shim-pack Amino系列色譜柱有什么注意事項?
有機相比例不高于10%,避免高溫停泵(0.1-0.3 ml/min降至室溫后再停泵)。
Question 10. Shim-pack Amino Na型和Li型色譜柱有什么區(qū)別?
Shim-pack Amino-Na:大概可分析19個化合物,一針分析時間為90分鐘,分析速度快,化合物少;
Shim-pack Amino-Li:大概可分析38個化合物,一針分析時間為180分鐘,分析速度慢,化合物多。
各位小伙伴如有更多關于液相柱選型相關問題或有更多相關知識補充,歡迎留言與我們交流。
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