創(chuàng)新性樣品制備方法，有效消除三甲胺易揮發(fā)性對實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確度的影響。

頂空進(jìn)樣結(jié)合GC-MS/MS測定，有效抑制了基質(zhì)化學(xué)干擾，保證結(jié)果可靠性。

堿改性SH-Volatil Amin有效提升了對三甲胺的惰性，改善峰形及分析穩(wěn)定性。

1.1 儀器

GCMS-TQ8050NX三重四極桿氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀

AOC-6000自動進(jìn)樣器

1.2 分析條件

頂空參數(shù)：

恒溫爐溫度：80 ℃

頂空針溫度：100 ℃

平衡時(shí)間：30 min

GC-MS/MS參數(shù)：

色譜柱：SH-Volatil Amin, 30 m x 0.32 mm x 5.0 μm, P/N：R227-36326-01

柱溫程序：40 ℃(0.5min)_20 ℃/min_200℃(5 min)

進(jìn)樣量：1 mL

進(jìn)樣方式：分流進(jìn)樣

分流比：10：1  

進(jìn)樣口溫度：200 ℃

載氣控制方式：恒流模式

柱流量：2 mL/min

離子化方式：EI

離子源溫度: 200 ℃

色譜質(zhì)譜接口溫度 : 230 ℃

檢測器電壓：調(diào)諧電壓+0.5kV

采集模式：MRM，離子對信息見表1

樣品前處理

3.1 三甲胺標(biāo)準(zhǔn)溶液譜圖

3.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線和質(zhì)量色譜圖

使用5%三氯乙酸溶液配制三甲胺鹽酸鹽標(biāo)準(zhǔn)溶液系列, 濃度分別為0.1、0.5、1.0、2.0、5.0和10.0μg/mL(以三甲胺計(jì))，精密量取各濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液2mL分別置于預(yù)制好的頂空瓶石蠟層上部，壓蓋密封后，進(jìn) GC-MS/MS分析。以三甲胺濃度為橫坐標(biāo)，三甲胺定量離子對峰面積為縱坐標(biāo)作標(biāo)準(zhǔn)曲線，標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖2 所示，線性相關(guān)系數(shù)如表2所示，三甲胺質(zhì)量色譜圖見圖3。

3.3 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)及檢出限

取三甲胺鹽酸鹽標(biāo)準(zhǔn)溶液(以三甲胺計(jì)，0.1μg/mL) 2mL置于預(yù)制好的頂空瓶石蠟層上部，平行制備樣品6份并連續(xù)進(jìn)樣，用于考察三甲胺峰面積的重復(fù)性，測定結(jié)果見表3。以3倍信噪比(峰至峰)計(jì)算檢出限，三甲胺儀器檢出限見表2。

3.4 加標(biāo)回收率

三甲胺是動物類中藥中內(nèi)源性化合物，同時(shí)由于三甲胺的易揮發(fā)性，在本實(shí)驗(yàn)中，選擇三甲胺鹽酸鹽標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)。美洲大鐮中加標(biāo)濃度分別為50和500mg/kg，按照前ER每個(gè)加標(biāo)濃度平行制備3份加標(biāo)樣品，考察回收率和RSD。50mg/kg加標(biāo)水平下，加標(biāo)回收率分布在88.08%-103.63% 之間，RSD為 9.10%；500 mg/kg加標(biāo)水平下，加標(biāo)回收率分布在93.39%-97.08%之間，RSD為2.06%；詳細(xì)結(jié)果見表4。

3.5 實(shí)際樣品分析結(jié)果

選取產(chǎn)地不同的地龍、美洲大鐮和水蛭為樣品，按前述樣品處理流程進(jìn)行樣品制備，并采用上述儀器條件測定，三甲胺檢測結(jié)果如表5所示。

含-NH-的化合物容易和色譜柱熔融石英表面-Si-OH形成分子間氫鍵，容易導(dǎo)致色譜峰拖尾和柱上吸附，影響胺類分析結(jié)果準(zhǔn)確性和重現(xiàn)性。

方法選擇：對于甲胺、二甲胺、三甲胺檢測一方面可以考慮離子色譜，另一方面可以考慮氣相色譜，分析揮發(fā)胺相對更簡單快速。

GC柱選擇：如使用常規(guī)色譜柱，建議增大膜厚以改善對胺類惰性，但吸附問題無法徹底消除，因此更建議堿改性揮發(fā)胺專用柱，一方面通過堿改性真實(shí)提升對胺類惰性，另一方面高膜厚增加了對揮發(fā)胺保留，從而有效分離揮發(fā)胺。