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新年新氣象！珀羅汀生物成功建立高通量全長膜蛋白表達平臺，重磅推出“從核酸到蛋白”的膜蛋白整體化解決方案。
膜蛋白約占主要藥物靶點的50%。然而，由于跨膜結構域具有高度疏水性，膜蛋白在表達和純化過程中不穩定，易于聚集和沉淀。全長膜蛋白的重組表達與純化的難題，制約了膜蛋白靶向藥物的開發。
（來源Ai圖）
無細胞蛋白表達技術（Cell Free Protein Synthesis, CFPS）是一種無活細胞參與、高開放性、高可控性的體外蛋白質生物合成技術。
通過加入去垢劑或納米盤的方式，無細胞表達體系可以為膜蛋白的跨膜結構域提供疏水環境，減少膜蛋白的錯誤折疊，實現全長跨膜蛋白可溶表達。CFPS所獲得的全長跨膜蛋白穩定性更高、更接近天然構象。
圖1 CFPS表達全長跨膜蛋白示意圖[1]
珀羅汀生物基于自主知識產權的無細胞蛋白表達技術，已成功表達多種單次、四次、七次全長跨膜蛋白，表達成功率接近100%！
案例展示：
珀羅汀生物基于自主知識產權的無細胞表達體系，結合高通量無細胞蛋白表達工作站，現已成功建立商業化的高通量全長膜蛋白表達平臺，推出“從核酸到蛋白”的膜蛋白整體化解決方案。
Step 1：去垢劑條件測試
不同去垢劑對各種膜蛋白的作用有所區別，因此在膜蛋白的分離與純化過程中需要有針對性地選用合適的、一定濃度的去垢劑。
首先，構建目的基因融合GFP的線性化表達模板，在含不同種類、不同濃度去垢劑的無細胞體系中進行表達測試，通過GFP熒光強度判定目的蛋白表達效果，快速優選3種去垢劑條件。
依托珀羅汀生物攜手玄刃科技打造的高通量無細胞蛋白表達工作站，可以實現高通量、自動化膜蛋白表達。在1 h內完成數百個無細胞反應體系自動構建，8 h內完成數百個膜蛋白去垢劑條件篩選。
Step 2：表達條件確定
在優選的3種去垢劑體系中，進一步篩選最適表達溫度，獲得一種最適表達條件。
Step 3：大量表達純化
確定表達條件后，構建無細胞表達質粒（不含GFP），根據蛋白需求量不同，采用毫升級或百毫升級無細胞反應生產膜蛋白。通過親和層析等純化方式，可獲得純度~80%的全長跨膜蛋白。
核心優勢
1. 膜蛋白全長表達（包含跨膜結構域），接近膜蛋白天然構象，能夠解決膜蛋白構象不穩定、易于沉淀或聚集、難分離純化等難題，且所表達膜蛋白具有生物學活性。
2. 高自動化水平。搭配高通量無細胞蛋白表達工作站，可以實現“從核酸到蛋白”的自動化蛋白表達，無需人工操作，建立蛋白表達的“黑燈工廠”。
3. 高表達通量。搭配高通量無細胞蛋白表達工作站，一天內可完成數百至數千個無細胞表達反應，獲得成百上千個蛋白。
4. 無需膜蛋白提取等復雜操作。膜蛋白在上清中可溶表達，可以直接用于下游活性檢測，無需常規蛋白表達所需的細胞裂解、膜蛋白提取等復雜操作。
5. 反應體系可以線性化放大，從50微升到升級別。
6. 可選納米盤（Nanodisc）體系。珀羅汀CFPS所獲得的膜蛋白，允許從去垢劑體系置換至Nanodisc體系，可直接用于ELISA等下游檢測。
未來，珀羅汀高通量膜蛋白表達平臺還將推出Nanodisc表達體系，使表達出的膜蛋白直接插入Nanodisc，獲得穩定性更高的膜蛋白！
讓天下沒有難表達的蛋白！
參考文獻：
[1]Manzer ZA, Selivanovitch E, Ostwalt AR, Daniel S. Membrane protein synthesis: no cells required. Trends Biochem Sci. 2023 Jul;48(7):642-654.
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