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單細胞懸液的制備過程中的注意事項

來源:上海易匯生物科技有限公司   2025年05月01日 17:20  

單細胞懸液的制備過程中的注意事項

單細胞懸液的制備質量對后續(xù)實驗結果有著至關重要的影響,以下是一些制備過程中的注意事項:


  1. 樣本采集與保存:采集腫瘤樣本時,應確保樣本的新鮮度和完整性,盡量減少離體時間。若不能立即進行實驗,需將樣本保存在合適的保存液中,并在規(guī)定時間內處理,以維持細胞活性。

  2. 無菌操作:整個制備過程需嚴格遵循無菌操作原則,使用無菌的器械、試劑和耗材,在超凈工作臺中進行操作,防止微生物污染,避免影響細胞質量和后續(xù)實驗結果。

  3. 酶消化條件優(yōu)化:酶消化是制備單細胞懸液的關鍵步驟,不同的腫瘤組織和細胞類型對酶的種類、濃度、消化時間和溫度要求不同。需預實驗優(yōu)化條件,避免消化不足導致細胞團塊過多,或消化過度損傷細胞表面抗原和活性。

  4. 機械操作輕柔:在機械解離或吹打細胞時,動作要輕柔,避免產生過多的剪切力,防止細胞破裂或受損。同時,盡量減少反復吹打次數(shù),以維持細胞的完整性。

  5. 避免細胞聚集:消化后的細胞容易聚集,可通過加入適量的抗凝劑、輕柔吹打或使用細胞篩過濾等方法來防止細胞聚集,確保獲得單細胞懸液。

  6. 細胞計數(shù)與活性檢測:制備完成后,需對細胞進行計數(shù)和活性檢測,常用臺盼藍染色法。確保細胞濃度和活性符合后續(xù)實驗要求,若細胞活性過低或濃度不合適,需調整實驗條件或重新制備。

  7. 緩沖液的選擇和使用:使用合適的緩沖液來維持細胞的生理狀態(tài),緩沖液的 pH 值、滲透壓等參數(shù)要與細胞內環(huán)境相匹配,以保證細胞在制備過程中的穩(wěn)定性和活性。

  8. 及時處理和實驗:制備好的單細胞懸液應盡快用于后續(xù)實驗,避免長時間放置導致細胞狀態(tài)發(fā)生變化,影響實驗結果的準確性。



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