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紫外可見分光光度計是分析化學中常用的精密儀器，用于測定樣品對紫外-可見波段(200-800 nm)光的吸收特性。其操作涉及光學系統、電子元件和化學樣品的協同配合，需嚴格遵循規范流程以確保數據準確性和儀器穩定性。以下是其使用細節的系統性總結：
一、開機前準備
1. 環境檢查
- 儀器需放置在平穩臺面，避免振動和強磁場干擾。
- 室溫建議控制在15-25℃，濕度低于60%，防止光學元件受潮或結露。
- 避免陽光直射或強光照射，關閉儀器周圍其他光源。
2. 儀器狀態確認
- 檢查電源電壓是否符合要求(通常為220V±5%)。
- 清理樣品室，確保無殘留液體或固體雜質。
- 檢查比色皿是否清潔干燥，石英皿(用于紫外區)和玻璃皿(用于可見區)需分類放置。
二、開機與預熱
1. 啟動程序
- 打開主機電源，啟動配套軟件(如配備電腦控制)。
- 部分儀器需單獨開啟氘燈(紫外光源)和鎢燈(可見光源)，注意點亮順序(通常先開氘燈，后開鎢燈)。
2. 預熱與校準
- 預熱：開機后需預熱15-30分鐘，使光源穩定、電子系統達到熱平衡。
- 波長校準：
- 紫外區(200-400 nm)：使用鈥玻璃(Hollow Cathode Lamp, HCL)的標準特征峰(如279.5 nm、365.0 nm)校準。
- 可見區(400-800 nm)：使用鐠釹濾光片(Pr-Nd Glass)校準，特征峰為585 nm和800 nm。
- 校準時需將參比溶液(如蒸餾水或空白溶劑)置于樣品池，調整波長至標準峰位，誤差應小于±0.5 nm。
三、樣品制備與裝載
1. 比色皿選擇與處理
- 紫外區(200-400 nm)：必須使用石英比色皿，避免玻璃對紫外光的吸收干擾。
- 可見區(400-800 nm)：可使用普通玻璃比色皿。
- 清潔方法：
- 石英皿：用1:1硝酸浸泡24小時，清水沖洗后用超純水潤洗，再用無水乙醇擦拭，晾干或氮氣吹干。
- 玻璃皿：用洗滌劑清洗，清水沖凈后擦干。
- 注意：手持比色皿時，僅觸摸兩側毛面，避免指紋或油污附著透光面。
2. 樣品加載
- 液體樣品需倒入比色皿至約2/3高度，避免過滿溢出。
- 固體樣品需配制成均勻懸濁液或溶解液，離心后取上清液測試。
- 裝樣后用鏡頭紙輕拭外部水漬，保持透光面清潔。
四、測量參數設置
1. 波長范圍與帶寬
- 根據樣品特性選擇掃描范圍(如核酸測260 nm，蛋白質測280 nm)。
- 帶寬設置需平衡靈敏度與分辨率：
- 窄帶寬(0.1-1 nm)：適用于精細光譜分析(如峰值定位)。
- 寬帶寬(2-5 nm)：用于快速掃描或低濃度樣品。
2. 基線校正
- 以空白溶劑(如蒸餾水、緩沖液)為參比，調零(調節透射率為100%或吸光度為0)。
- 若樣品信號較弱，可啟用“暗電流校正”功能，消除檢測器噪聲。
3. 掃描模式與速度
- 定量分析：固定波長下測量吸光度(A)。
- 定性分析：全波長掃描(如200-800 nm)，掃描速度建議設為中速(如200 nm/min)，避免過快導致信號失真。
五、測量操作要點
1. 比色皿定位
- 放入樣品池時，確保比色皿標記對準光路方向(部分儀器需固定透光方向)。
- 多樣品測試時，按濃度梯度從低到高依次測量，避免高濃度樣品殘留影響低濃度結果。
2. 數據記錄
- 記錄吸光度(A)、透射率(T%)、波長(λ)及測試日期、樣品名稱等信息。
- 重復測量3次取平均值，RSD(相對標準偏差)應小于1%。
3. 異常處理
- 若吸光度超出線性范圍(A>1.5或A<0.01)，需稀釋或濃縮樣品后重新測試。
- 基線漂移時，檢查光源強度(氘燈/鎢燈是否老化)、比色皿是否污染或參比溶液是否失效。
六、關機與維護
1. 關機步驟
- 先關閉氘燈和鎢燈，待散熱風扇停止后關閉主機電源。
- 拔下電源插頭，蓋好防塵罩。
2. 日常維護
- 每次使用后清潔樣品室，定期用無水乙醇擦拭光源窗口和檢測器窗口。
- 每月檢查氘燈使用時長(通常壽命為1000-2000小時)，及時更換老化燈泡。
- 每季度校準波長和吸光度準確性，使用標準溶液(如重鉻酸鉀溶液)。
3. 長期存放
- 儀器內放置干燥劑，避免光學元件受潮霉變。
- 切斷電源，罩上防塵布，存放于陰涼干燥處。
七、安全注意事項
1. 避免直視光源，尤其是紫外光，需佩戴防護眼鏡。
2. 測試揮發性、腐蝕性或有毒樣品時，應在通風櫥內操作，并戴手套。
3. 比色皿清洗廢液需按實驗室規范處理，禁止隨意傾倒。
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