引言
CRISPR/Cas9基因編輯系統需高效遞送至細胞核，但傳統方法難以實時追蹤遞送過程。FITC-Polylysine通過標記Cas9蛋白或sgRNA，可實現基因編輯工具的動態可視化，為優化遞送效率和降低脫靶效應提供數據支持。

載體設計與功能

1. 結構組成：

· FITC-Polylysine：標記載體位置，提供熒光追蹤功能。

· Cas9蛋白/sgRNA復合物：通過靜電作用與聚賴氨酸結合，形成納米級遞送系統。

· 核定位信號（NLS）：促進載體-基因復合物進入細胞核。

2. 功能優化：

· 細胞穿透肽修飾：增強載體跨膜能力。

· 光控釋放系統：通過近紅外光觸發基因釋放，提高時空精準性。

在基因編輯中的應用

1. 遞送效率評估：

· 熒光信號顯示載體在細胞質和細胞核的分布，指導核定位信號的密度優化。

2. 脫靶效應分析：

· 結合全基因組測序，比較熒光標記組與非標記組的脫靶位點頻率，驗證載體安全性。

案例研究
在HEK293T細胞中，FITC-Polylysine標記的Cas9/sgRNA復合物在4小時內實現核內富集，基因編輯效率達60%，顯著高于未標記組（40%）。該策略為臨床前基因治療研究提供了可視化工具。

技術局限性

· 熒光淬滅：長時間曝光可能導致信號衰減，需采用脈沖式成像或抗淬滅培養基。

· 代謝影響：聚賴氨酸的陽離子特性可能影響細胞代謝，需通過低劑量給藥減少干擾。