揭示lncRNA Gm28309在RAW264.7和THP-1巨噬細胞中調控布魯氏菌炎癥反應的ceRNA機制

1. 文章主要研究方向

標題：《Brucella-Induced Downregulation of lncRNA Gm28309 Triggers Macrophages Inflammatory Response Through the miR-3068-5p/NF-κB Pathway》

方向：研究布魯氏菌（Brucella）感染如何通過下調長鏈非編碼RNA（lncRNA Gm28309）激活miR-3068-5p/NF-κB信號通路，從而觸發巨噬細胞的炎癥反應及其分子機制。

2. 2024年影響因子

期刊：Frontiers in Immunology

影響因子：約8.8。

3. ZETA life轉染試劑（AD600150）的應用

轉染細胞及基因：

• RAW264.7細胞（小鼠巨噬細胞系）：

  ? 轉染基因：lncRNA Gm28309過表達質粒（Gm28309-pcDNA3.1）、miR-3068-5p mimic/inhibitor、siRNA靶向p65（NF-κB抑制劑）。

• THP-1細胞（人單核細胞系，經PMA誘導為巨噬細胞）：

  ? 轉染基因：siRNA靶向候選lncRNAs（如P33714、P3852等）。

4. 轉染實驗數據及解讀

具體實驗數據：

1. RAW264.7細胞轉染Gm28309（圖4A, 4D）：

  ? 結果：過表達Gm28309顯著降低NLRP3炎癥小體蛋白（NLRP3、Pro-caspase-1）和炎性因子（IL-1β、IL-18）的表達（p<0.05）。

  ? 解讀：ZETA life試劑高效遞送Gm28309質粒，驗證了其對炎癥的負調控作用。

2. THP-1細胞轉染siRNA靶向lncRNAs（圖3A, 3B）：

  ? 結果：敲低P33714（Gm28309人源同源物）增加IL-1β/IL-18分泌，促進布魯氏菌清除（p<0.01）。

  ? 解讀：試劑成功遞送siRNA，證明lncRNA在炎癥中的關鍵角色。

3. RAW264.7轉染miR-3068-5p mimic（圖5C, 5D）：

  ? 結果：miR-3068-5p過表達降低kB-Ras2（NF-κB抑制因子）的熒光素酶活性，激活炎癥通路。

  ? 解讀：試劑高效轉染miRNA，揭示ceRNA調控機制。

ZETA life試劑的貢獻：

• 高轉染效率確保基因操作（過表達/敲低）的可靠性，支撐了全文分子機制驗證。

• 低細胞毒性保障了炎癥相關基因表達的精準檢測。