以下是使用奧林巴斯 SZ61 顯微鏡觀察小鼠解剖血管的方法:
1.觀察前準備
樣品制備:將小鼠進行解剖,暴露需要觀察的血管部位。為了更好地觀察血管結構,可以對血管進行適當的處理,如注射染料使血管顯色,或者進行固定、切片等操作。如果是觀察血管切片,需將切片放置在載玻片上,并滴加適量的生理鹽水或封片劑,蓋上蓋玻片。
顯微鏡檢查與調節:
打開電源:開啟顯微鏡主電源,通過亮度調節旋鈕將光源亮度調至合適水平,初始時可設置為較低亮度,后續根據觀察情況再進行調整。
選擇照明模式:根據樣品的特點和觀察需求,選擇合適的照明模式,如明場模式適用于觀察一般的血管結構,暗場模式則可以突出血管的邊緣和細節,對于觀察透明或折射率差異較小的血管組織可能更有幫助。
調節目鏡管:調節目鏡管的高度和視距,使兩只目鏡的像視距適合使用者的眼睛間距和視力。同時,調整瞳孔間距,直到兩眼所觀察到的圖像重合。
2.觀察步驟
低倍鏡觀察:
放置樣品:將制備好的小鼠血管樣品放在載物臺上,用壓片夾固定好,確保樣品位于載物臺的中心位置,以便于觀察。
粗調焦:轉動粗調焦旋鈕,快速大范圍地調節焦距,使樣品大致成像。在調節過程中,要從側面觀察物鏡與樣品之間的距離,防止物鏡碰撞到樣品。
找到目標:通過目鏡觀察,同時移動載物臺,找到需要觀察的血管區域。低倍鏡下可以先觀察血管的整體分布和大致形態,確定感興趣的部位,以便進一步在高倍鏡下觀察細節。
高倍鏡觀察:
1.切換物鏡:在低倍鏡下找到目標后,根據需要轉動變倍旋鈕,將放大倍數切換到合適的高倍鏡(如使用 10 倍目鏡時,可將總放大倍數從低倍切換到 45 倍左右)。
微調焦:使用微調焦旋鈕進行精細的焦距調整,直至血管的細節清晰成像。在高倍鏡下,可以觀察到血管的管壁結構、內皮細胞等更細微的特征。同時,可根據觀察情況,適當調整光源亮度和對比度,以獲得更好的觀察效果。
2.LV2000顯微鏡相機觀察與記錄:仔細觀察血管的形態、結構和相關特征,如血管的管徑大小、管壁的厚度、血管內的血液流動情況(如果是新鮮樣品且條件允許的話)等??梢允褂美L圖或拍照的方式記錄觀察結果,以便后續分析和對比。如果顯微鏡配備了數碼攝像頭和成像軟件,可以通過軟件設置圖像的分辨率、色彩模式、對比度、亮度等參數,然后進行圖像采集和保存。
3.注意事項
避免鏡頭污染:在觀察過程中,要注意避免樣品上的液體或其他物質污染鏡頭。如果不小心污染了鏡頭,應及時用干凈的擦鏡紙輕輕擦拭,必要時可使用專門的鏡頭清潔液,但要注意使用方法,避免損壞鏡頭。
防止樣品干燥:如果觀察的是新鮮的小鼠血管樣品,要注意保持樣品的濕潤,防止其干燥。可以在觀察過程中適時滴加生理鹽水或其他合適的保濕液。
4.小心操作:在調節焦距和移動載物臺時,要動作輕柔,避免劇烈震動或碰撞,以免損壞樣品或顯微鏡部件。
注意生物安全:小鼠解剖過程中要遵循生物安全規范,對使用過的器械和樣品進行妥善處理,防止生物污染。觀察完畢后,關閉電源,及時清理載物臺和顯微鏡表面,保持顯微鏡的清潔。
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