無菌技術主要包括

1、對實驗操作的空間、操作者的衣著和手，進行清潔和消毒;

2、將用于微生物培養的器皿、接種的用具和培養基等進行滅菌;

3、為避免周圍環境中微生物的污染，實驗操作應在酒精燈火焰附近進行，

4、實驗操作時應避免已經滅菌處理的材料用具與周圍的物品相接觸

一、倒平板

1、培養基滅菌后，需冷卻至50℃左右時才能倒平板。

2、左手拿培養皿，右手拿錐形瓶，左手拇指和食指將培養皿打開一條稍大于瓶口的縫隙，不要打開。

3、整個操作在酒精燈火焰旁進行，避免雜菌污染。

4、平板冷卻后要倒置的原因：防止皿蓋上的冷凝水落入培養基，造成污染。

5、若倒平板時，培養基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個平板應丟棄。

二、平板劃線操作

次劃線及每次劃線之前都要灼燒滅菌，劃線操作結束仍需灼燒接種環，每次灼燒目的總結如下表：

1、將接種環放在火焰上灼燒，直到接種環燒紅;2、在火焰旁冷卻接種環，并打開盛有菌液的試管的棉塞;

3、將試管口通過火焰;4、將已冷卻的接種環伸入菌液中，沾取一環菌液;

4、將試管口通過火焰，并塞上棉塞;6、左手將皿蓋打開條縫隙，右手將沾有菌種的接種環迅速伸入平板內，劃三至五條平行線，蓋上皿蓋。注意不要劃破培養基。

7、灼燒接種環，待其冷卻后，從區域劃線的末端開始往第二區域內劃線。重復以上操作，在三區域內劃線。注意不要將-區域的劃線與-區相連。8、將平板倒置，放入培養箱中培養。

三、稀釋涂布平板

1、稀釋操作時：

每支試管及其中9mL水、移液管均需滅菌；操作時，試管口和移液管應在離火焰1－2cm處。

2、涂布平板時：

①涂布器用70％酒精消毒，取出時，多余酒精在燒杯中滴盡，沾有少量酒精的涂布器在酒精燈火焰上引燃。

②不要將過熱的涂布器放在盛放酒精的燒杯中，以免引燃其中的酒精。

③酒精燈與培養皿距離要合適，移液管頭不要接觸任何物體。

三、擺斜面

裝在試管中的瓊脂培養基，在滅菌完成后，趁熱立即擺放在木棒（或玻璃棒）上，并成適當的斜度，冷卻后，瓊脂凝固即成斜面。斜面長度不用超過試管二分之一。

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