如何捕捉弱熒光下的顯微鏡圖像--同舟同德專業(yè)熒光顯微鏡
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如何在弱熒光條件下獲取顯微圖像,一直是顯微鏡廠家和圖像采集裝置者一直在努力探求改善的課題。有越來越多的方法出現(xiàn)來改善這一狀況:
1)先,應(yīng)該選取高質(zhì)量的熒光顯微鏡,和適用于不同熒光光譜的熒光物鏡;
2)清洗干凈的樣品載體(如載玻片、蓋玻片等),消除不必要的雜熒光干擾;
3)盡量完善的樣品制備;
4)選取合適的激發(fā)光源;
5)選取高敏感度和大動態(tài)范圍的CCD,當(dāng)然也可能是EMCCD之類的;
在上述條件的基礎(chǔ)上,數(shù)碼攝像頭的調(diào)整可以適當(dāng)增加增益,但小心因之而引起的信噪比下降,還可以用過濾的方法盡量消除噪音信號。另外,想要降低數(shù)碼攝像頭的分辨率還可以使用bin,很多使用者在拍攝熒光圖像時,也使用很高的分辨率,在通常情況下是得不償失的。
6)我們還可以通過增加曝光時間來達到這一目的,當(dāng)然要注意時間延長對樣品的淬滅影響,如果可以,可以用一些抗淬滅劑;
7)當(dāng)然降低拍攝環(huán)境光線的干擾(背景光)也是非常重要的。
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