染色體步移技術(genome walking)是一種關緊的分子生物科學研討技術,運用這種技術可以管用取得與已知序列相鄰的未知序列。
染色體步移技術主要有以下幾方面的應用:
①依據已知的基因或分子標記蟬聯步移,取得人、動物和植物的關緊調節控制基因,可以用于研討結構基因的表現調節控制。如離合克隆開始工作子并對其功能施行研討;
②步查取得新物種中基因的非守舊地區范圍,因此取得完整的基因序列;
③鑒定T-DNA或轉座子的插進去位點,鑒定基因槍轉基因法等轉基因技術所造成的外源基因的插進去位點等;
④用于染色體測序辦公中的窟窿眼兒填補,取得完整的基因組序列;
⑤用于人工染色體PAC、YAC和BAC的斷片搭接。
對于基因組測序已經完成的少量物種(如人、小鼠、線蟲、稻子、擬南芥等)來說,可以輕松地從數值庫中找到某物種已知序列的翼側序列。不過,對于大部分數有生命的物質而言,在不成解他們的基因組序列曾經,想要曉得一個已知地區范圍兩側的DNA序列,只能認為合適而使用染色體步移技術。
以PCR技術為基礎的染色體步移的主要問題是,電熱恒溫鼓風干燥箱在預先不成解未知地區范圍序列信息的事情狀況下,怎么樣預設兩個特別優異性引物來擴增未知地區范圍。而傳統的染色體步移辦法,如:逆向PCR法、連署接頭法等,都有操作復雜、非特別優異性擴增、連署速率劣等弊病。
TaKaRa新產品之Genome Walking Kit試藥盒是一種依據已知基因組DNA序列,取得翼側未知序列的試藥盒。相對于其他傳統辦法,本試藥盒具備、簡單方便、特別優異性高、銳敏度高、一次性取得的未知序列較長等*的地方。其主要原理是依據已知DNA序列,作別預設三條同向且退火溫度較高的特別優異性引物(SP Primer),與試藥盒中供給的四種通過*特別預設的退火溫度較低的兼并引物,即AP1、AP2、AP3、AP4施行熱錯誤稱PCR反響。
一般事情狀況下真空干燥箱,那里面至少有一種兼并引物可以與特別優異性引物之間利用退火溫度的差別施行熱錯誤稱PCR反響,經過三次巢式PCR反響即可取得已知序列的翼側序列。假如一次實驗取得的長度不可以滿意實驗要求時,還可以依據步移取得的序列信息,接著施行翼側序列取得。這個之外,本試藥盒中還包括Control DNA及Control Primer,可以便捷施行Control實驗。
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