煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（nicotinamide adenine dinucleotidephosphate，簡稱NADP）與NAD的不同之處只在于其分子有一個額外的磷酸基，NADPH是它的還原形式。NADP+參與生物合成反應，如脂質和核酸的合成。在動物細胞中，戊糖磷酸途徑的氧化階段是NADPH的極重要來源。NADP/NADPH的定量測定在細胞或組織的能量轉化和氧化還原狀態的研究中具有重要應用價值。

艾美捷 NADP/NADPH 檢測試劑盒（熒光法）：

目錄代碼：BA0107

包裝尺寸：100assays

僅供研究使用

NADP/NADPH 檢測試劑盒應用程序

直接測定：細胞或組織提取物中NADP’/NADPH的濃度和比率。

NADP/NADPH 檢測試劑盒主要功能：

1、靈敏準確。96孔板法檢測限為0.01μM，線性高達1μM NADP+/NADPH。實用的該程序包括添加一種工作試劑，并在時間0和30讀取熒光

Zui低室溫測定。

2、高吞吐量。可作為每天數千個樣品的高通量96孔板法容易地自動化。

儲存條件：這套裝備是用冰塊裝運的。將所有試劑儲存在20°C的溫度下。保質期：收到后6個月。

注意事項：試劑僅供研究使用。使用試劑時，應采取實驗室試劑的常規預防措施。有關詳細信息，請參閱材料安全數據表。

一般注意事項：

1.在這些濃度下，NADP’和NADPH的標準曲線是相同的。由于溶液中的NADPH不穩定，我們只提供NADP作為標準。

2.該測定基于酶催化的動力學反應。工作試劑的添加應迅速，混合應簡短但徹-底。建議使用多通道移液器。

3.以下物質會干擾樣品制備，應避免使用。EDTA（>0.5 mM）、抗壞血酸、SDS（>0.2%）、疊-氮-化-鈉、NP-40（>1%）和Tween-20（+1%）。

程序

1.樣品制備。對于每個樣品重量約為20 mg的組織，用冷PBS清洗。對于細胞樣品，用冷PBS洗滌細胞，每個樣品用約105個細胞沉淀。將樣品（組織或細胞）在1.5 mL Eppendorftube中用100μL NADP提取緩沖液（用于NADP測定）或100μL NADPH提取緩沖液均勻化（用于NADPH測定）。將提取物在60°C下加熱5分鐘，然后加入20μL測定緩沖液和100μL反向提取緩沖液以中和提取物。短暫渦旋并以14000rpm旋轉樣品5分鐘。使用上清液進行NADP’/NADPH測定。NADP+和NADPH濃度的測定需要從兩個單獨的樣品中提取。

2.校準曲線。準備500mL 1µM NADP+預混物，混合5mL 1mM標準和4995mL蒸餾水。稀釋標準品如下：

3.樣品。在單獨的孔中，每孔添加50μL樣品。

4.試劑制備。對于每個反應井，通過混合40μL測定緩沖液、1μL酶A、1μL-酶B、10μL葡萄糖和5μL探針來制備工作試劑。建議重新配制。

5.反應。每孔快速加入50μL工作試劑。輕敲盤子攪拌。

6.在室溫下孵育30分鐘后，在λev/em=530/585 nm下讀取時間“零"（Fo）和F3o的熒光。在培養過程中，請保護培養板免受光照。

文獻參考：

1.Zhao, Z, Hu, X and Ross CW (1987). Comparison of Tissue Preparation Methods for Assay of Nicotinamide Coenzymes.Plant Physiol.84:987-988.

2.Matsumura, H. and Miyachi S (1980). Cycling assay for nicotinamide adenine dinucleotides. Methods Enzymol. 69:

465-470.

3. Vilcheze, C et al.(2005). Altered NADH/NAD+ Ratio Mediates Coresistance to lsoniazid and Ethionamide inMycobacteria. Antimicrobial Agents and Chemotherapy.49(2): 708-720.