谷胱甘肽瓊脂糖磁珠
MCE 國際站:Glutathione Magnetic Agarose Beads
品牌:MedChemExpress (MCE)
存儲條件:4°C,2 年
簡介:MCE Glutathione Magnetic Agarose Beads 可用于純化各表達系統表達的谷胱甘肽-S-轉移酶、谷胱甘肽依賴性蛋白和谷胱甘肽轉移酶的重組衍生物。
概述:MCE Glutathione Magnetic Agarose Beads 以磁性交聯瓊脂糖為基質,表面共價偶聯 GSH 配基,可用于純化各表達系統表達的谷胱甘肽-S-轉移酶、谷胱甘肽依賴性蛋白和谷胱甘肽轉移酶的重組衍生物。本品儲存于 20%乙醇中, MCE Glutathione Magnetic Agarose Beads 占懸浮液總體積的 20%,使用前需將產品充分重懸混勻后吸取。本產品可通過磁力架(MCE 產品目錄號:HY-K0200)或自動分離儀器直接從生物樣品中一步純化出高純度的目標蛋白,極大地簡化純化工藝和提高純化效率。MCE Glutathione Magnetic Agarose Beads 具有較高的 GST 標簽融合蛋白加載容量 (5-10 mg 蛋白/mL Settled Beads),也可用于 GST-tag 蛋白的 Pull-down 實驗。
描述:
MCE 谷胱甘肽磁性瓊脂糖珠基于磁性交聯瓊脂糖,可有效純化各種規模的高水平過表達 GST 標記融合蛋白。 MCE 谷胱甘肽磁性瓊脂糖珠具有高蛋白質結合能力和穩定性,使其成為大腸桿菌、酵母、昆蟲和哺乳動物表達系統中表達的 GST 標記融合蛋白的高性能純化的理想選擇。
• 方便省時。
• 低非特異性結合。
• 樣品損失最小。
• 蛋白質結合能力高達 5-10 mg/mL 沉降珠。
• 穩定,一瓶解決方案。
操作說明:GST 標簽蛋白純化(1) 瓊脂糖磁珠預處理混懸 Glutathione Magnetic Agarose Beads,根據樣品裂解液中 GST 融合蛋白的量吸取適量的瓊脂糖磁珠,置于離心管中,加入適量的平衡/洗滌緩沖液,充分混懸,置于磁力架上磁性分離,棄上清;重復以上洗滌步驟 2 次。(2) 樣品的結合加入適量的樣品裂解液,充分混懸,置于翻轉混合儀孵育 (室溫,30 分鐘;4℃,1 小時),磁性分離,收集瓊脂糖磁珠。上清液收集于新的離心管中,以備后續檢測使用。(3) 洗滌加入 2 倍瓊脂糖磁珠體積的平衡/洗滌緩沖液,充分混懸,磁性分離,棄上清。重復以上洗滌步驟 2 次。(4) 洗脫加入 3-5 倍瓊脂糖磁珠體積的洗脫緩沖液,充分混懸,置于翻轉混合儀或手工輕輕翻轉離心管,室溫孵育 5-10 分鐘。分離磁珠,收集上清至新的離心管,即為洗脫完成的目的蛋白,樣品用于后期功能分析。蛋白 Pull-Down 實驗(1) 瓊脂糖磁珠預處理混懸 Glutathione Magnetic Agarose Beads,取 100 μL 瓊脂糖磁珠,置于 1.5 mL EP管中,加入 500 μL 平衡/洗滌緩沖液,充分混懸,置于磁力架上磁性分離,棄上清。重復以上洗滌步驟 2 次。(2) 靶蛋白-瓊脂糖磁珠的結合a. 在上述分離得到的磁珠中加入 500 μL 含 GST 標簽的靶蛋白樣品,充分混懸,置于翻轉混合儀孵育 (室溫,30 分鐘;4℃,1 小時),磁性分離,棄上清。b. 加入 1 mL 平衡/洗滌緩沖液,充分混懸磁珠,磁性分離,棄上清,重復以上洗滌步驟 2 次,得到 GST 融合蛋白-磁珠復合物。(3) 目標蛋白與 GST 融合蛋白-磁珠復合物的結合a. 加入 500 μL 含目標蛋白的樣品裂解液,充分混懸,置于翻轉混合儀孵育 (室溫,30 分鐘),磁性分離,收集瓊脂糖磁珠。上清液收集于新的 EP 管中,以備后續檢測使用。b. 在上述分離得到的磁珠中加入 1 mL 平衡/洗滌緩沖液,充分混懸磁珠,磁性分離,棄上清,重復以上洗滌步驟 2 次。(4) 洗脫在上述 EP 管中加入 3-5 倍瓊脂糖磁珠體積的洗脫緩沖液,充分混懸,置于翻轉混合儀或手工輕輕翻轉離心管,室溫孵育 5-10 分鐘。分離磁珠,收集上清至新的 EP 管,即得到 GST 融合蛋白與目標蛋白的復合物。
注意事項:(1) 本產品 pH 值為 6-8,禁止凍結。(2) 本產品應避免離心、干燥或凍存,禁止長時間置于磁場,可能會引起磁珠聚團,降低結合活性。(3) 本產品可重復使用,若純化不同種類蛋白時,建議使用新的瓊脂糖磁珠。(4) 從磁珠保存管中移取磁珠前應充分振蕩混勻,操作過程中動作應輕柔,并避免產生氣泡。(5) 為最大限度的降低蛋白質降解,請配合使用 MCE 蛋白酶抑制劑 cocktails (MCE 產品目錄號:HY-K0010,HY-K0011)。(6) 樣品及緩沖液中加入 1-10 mM 的 DTT,有助于提高部分 GST 融合蛋白與瓊脂糖磁珠的結合。(7) 如果目的蛋白沒有被洗脫下來,可能原因為洗脫液中的還原型谷胱甘肽被氧化,因此建議使用新鮮配制的洗脫液。(8) 本產品僅限于專業人員的科學研究用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品。(9) 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
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