ATP發光法細胞活力檢測試劑盒
MCE 國際站：Cell-ATP Viability Detection Kit
品牌：MedChemExpress (MCE)
存儲條件： -20°C，一年避光保存
簡介：MCE ATP 發光法細胞活力檢測試劑盒基于高靈敏度生物發光檢測技術，通過對 ATP 進行定量以測定培養物中活細胞數目及細胞活力。
概述：MCE ATP 發光法細胞活力檢測試劑盒基于高靈敏度生物發光檢測技術，通過對 ATP 進行定量以測定培養物中活細胞數目及細胞活力。ATP 是細胞新陳代謝的一個重要指標，其與活細胞數目呈良好的線性關系，是細胞活力檢測的重要標志性分子。ATP 生物發光技術的原理為：熒光素酶以熒光素、三磷酸腺苷 (ATP) 和 O2 為底物，在 Mg2+ 存在時，可將化學能轉化為光能；在熒光素酶催化的發光反應中，ATP 在一定的濃度范圍內，其濃度與發光強度呈線性關系，即在光信號與酶反應體系中，發光值與 ATP 呈正比，ATP 與活細胞數成正比。基于此，ATP 法便可通過 ATP 含量來進行細胞計數或活力測定，且不受化合物自發熒光的影響。使用時，只需將本試劑等體積添加至培養細胞中即可進行檢測，均質檢測方案避免了同類檢測產品使用時的細胞洗滌、培養基去除及多步加樣等操作，簡便快捷，減少操作誤差。與常用的 MTT、CCK8 法相比，ATP 法具有反應更迅速、靈敏度更高、線性范圍更廣、信號更穩定及便捷高效等優點。本品與常用的細胞培養基兼容，如 RPMI1640、MEM、DMEM 和 Ham's F12，也不受酚紅和有機溶劑的影響，誤差小，準確率高，且適用于自動化高通量篩選，為細胞增殖與毒性分析提供了更加高效、便捷的解決方案。
描述：
ATP是細胞代謝的重要指標，與活細胞數量呈良好的線性關系。ATP生物發光技術原理為：熒光素酶以熒光素、三磷酸腺苷（ATP）和O2為底物，在Mg2+存在下將化學能轉化為光能。在Luciflucase催化的發光反應中，在一定濃度范圍內，ATP濃度與發光強度呈線性關系，ATP的量與細胞數量成正比。基于此，Cell-ATP活力檢測試劑盒可用于細胞計數或通過ATP含量測定活力。
MCE Cell-ATP活力檢測試劑盒是基于高靈敏度的ATP生物發光檢測技術，用于檢測培養中的活細胞數量和活力。
操作說明：熒光素酶的活性對溫度較為敏感，故在實驗開始前，應先將本試劑與細胞平衡至室溫后再進行測定。多次使用時，建議將本產品適當分裝凍存。根據實驗需求，選擇適用于化學發光檢測的孔板用于本實驗 (如適合細胞培養的白色或黑色多孔板)，以下以 96 孔板舉例。1. 細胞準備接種細胞：在 96 孔板中每孔接種 100 μL 細胞，確保每孔細胞數量在 5 × 104 以內。設置不含細胞的培養液孔作為陰性對照，按照培養細胞的常規方法進行培養。注：a) 接種細胞數目因檢測所用孔板不同存在差異，如用 384 孔板，每孔接種 25 μL 細胞，確保每孔細胞數量在 1 × 104 以內。b) 可根據實驗目的設計實驗方案，如：加入藥物處理細胞，應注意設置對照。若待測藥物的溶劑含量較高，熒光素酶反應可能會被干擾，致化學發光信號受到影響，可設置含有溶劑的細胞培養液的對照孔以排除此干擾。c) 建議設置細胞濃度梯度，以確定 ATP 檢測的條件。2. 檢測試劑的準備按照 96 孔板每孔 100 μL 的Cell-ATP Viability Detection Reagent 的量 (384 孔板每孔 25 μL 的 Cell-ATP Viability Detection Reagent 的量)，即V細胞：VCell-ATP Reagent= 1:1)，取適量本產品，解凍后平衡至室溫。3. 細胞活力檢測1) 取出細胞培養板，室溫平衡 10 min。注：室溫平衡通常不建議超過 30 min。2) 向 96 孔板的每孔加入 100 μL Cell-ATP Viability Detection Reagent (384 孔板每孔加入 25 μL Cell-ATP Viability Detection Reagent) 。3) 室溫振蕩混勻 2 min，以促進細胞充分裂解。4) 室溫孵育 10 min，使發光信號趨于穩定。5) 使用具有檢測化學發光功能的多功能酶標儀進行化學發光測定，每個孔的檢測時間一般為 0.25-1 s。注：具體參數可根據儀器類型及檢測靈敏度進行適當調整。6) 根據化學發光讀數直接計算細胞的相對活力，或根據 ATP 標準曲線計算出 ATP 的量以計算出細胞的相對活力。注：檢測效果可能會因細胞種類及生長狀態不同而有所差異，對于一些 ATP 含量特別高的細胞，當細胞數量至 5 × 104 后可能不會再呈現明顯的線性關系，但化學發光讀數還是會繼續升高。
注意事項：1. 本產品中含有熒光素酶，其活性對溫度較為敏感，反復凍融會致其逐漸失活，建議分裝凍存，避免反復凍融。2. 本產品避免室溫保存，如需多次使用，建議將試劑分裝后凍存，分裝所用耗材應避免 ATP 污染。3. 反復凍融時，可能會導致試劑中出現少量沉淀，可平衡至室溫后觀測沉淀溶解情況，如仍有殘留，可離心后去除。4. 若待測藥物的溶劑含量較高，熒光素酶反應可能會被干擾，致化學發光信號受到影響，可設置含有溶劑的細胞培養液的對照孔以排除此干擾。5. 檢測時需使用適合于細胞培養的白色或黑色的多孔板 (96 孔板或 384 孔板)，普通透明多孔板的相鄰孔之間可能會產生相互干擾。6. 本產品僅限于專業人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品。7. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作
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