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小鼠 CD4+ T 細(xì)胞陰性分選試劑盒

MCE 國際站：Mouse CD4+ T Cells Negative Selection Kit

品牌：MedChemExpress (MCE)

存儲條件：4℃，2 年磁珠禁止凍結(jié)

簡介：MCE 小鼠 CD4+ T 細(xì)胞陰性分選試劑盒可以從小鼠脾臟細(xì)胞、淋巴結(jié)或其它組織的單細(xì)胞懸液中分離出 CD4+ T 細(xì)胞。

概述：MCE 小鼠 CD4+ T 細(xì)胞陰性分選試劑盒可以從小鼠脾臟細(xì)胞、淋巴結(jié)或其它組織的單細(xì)胞懸液中分離出 CD4+ T 細(xì)胞。原理為生物素 (biotin) 標(biāo)記的單克隆抗體對非目標(biāo)細(xì)胞（非 CD4+ T 細(xì)胞）進(jìn)行標(biāo)記，再通過鏈霉親和素 (streptavidin) 標(biāo)記的磁珠對非目標(biāo)細(xì)胞進(jìn)行去除，從而達(dá)到小鼠 CD4+ T 細(xì)胞分選的目的。MCE 小鼠 CD4+ T 細(xì)胞陰性分選試劑盒操作簡單便攜，各成分對細(xì)胞均無毒性，且可實(shí)現(xiàn)高純度細(xì)胞分離的目的，分離的細(xì)胞可用于下游應(yīng)用，例如流式細(xì)胞術(shù)、細(xì)胞培養(yǎng)、Western blot 分析、免疫沉淀、報(bào)告基因檢測或 DNA/RNA 提取等。MCE 小鼠 CD4+ T 細(xì)胞陰性分選試劑盒具有如下優(yōu)點(diǎn)：簡單快速：15 min 即可分選得到目的細(xì)胞；無需分離柱：使用磁性分離器即可實(shí)現(xiàn)目的細(xì)胞的快速分離；高純度：分選細(xì)胞純度可達(dá) 95% 以上；高活性：分選后獲得 99% 以上的活細(xì)胞，且細(xì)胞功能良好可用于下游實(shí)驗(yàn)。

描述：

MCE 小鼠 CD4⁺ T 細(xì)胞負(fù)選試劑盒用于從小鼠脾細(xì)胞、淋巴結(jié)或其他組織的單細(xì)胞懸浮液中分離 CD4⁺ T 細(xì)胞。其原理在于利用生物素標(biāo)記的單克隆抗體標(biāo)記非靶細(xì)胞（非 CD4⁺ T 細(xì)胞），隨后使用鏈霉親和素標(biāo)記的磁珠去除這些細(xì)胞。此過程可有效促進(jìn)人類 CD4⁺ T 細(xì)胞的分選。

該試劑盒易于使用且便于攜帶，其成分對細(xì)胞無毒。它能夠分離高純度細(xì)胞，所得細(xì)胞可用于各種下游應(yīng)用。這些包括流式細(xì)胞術(shù)、細(xì)胞培養(yǎng)、蛋白質(zhì)印跡分析、免疫沉淀 (IP)、報(bào)告基因檢測和 DNA/RNA 提取。

MCE 小鼠 CD4⁺ T 細(xì)胞負(fù)選試劑盒的特點(diǎn)

效率：快則 15 分鐘即可對目標(biāo)細(xì)胞進(jìn)行分選；

無需分離柱：使用磁分離器快速分離細(xì)胞，無需使用分離柱；

高純度：可獲得純度超過 97% 的分選細(xì)胞；

高活性：分選后的細(xì)胞不含抗體和磁珠標(biāo)記，并保留高活性和功能性以用于下游實(shí)驗(yàn)。

操作說明：以分選小鼠脾臟CD4+ T細(xì)胞為例1. 制備小鼠脾臟單細(xì)胞懸液：在 70 μm 細(xì)胞篩網(wǎng)上研磨脾臟，以預(yù)冷的 PBS 沖洗細(xì)胞篩網(wǎng)，收集細(xì)胞懸液于 50 mL 離心管中，500 × g 離心 5 min，棄上清。2. 加入 5 mL 紅細(xì)胞裂解液 (ACK)，室溫裂解 5 min，再加入 20 mL PBS重懸細(xì)胞，500 × g 離心 5 min，棄上清。注：a. 紅細(xì)胞裂解步驟可根據(jù)所用裂解液的不同調(diào)整用量及時間。b. 少量紅細(xì)胞殘留不會影響后續(xù)分選及細(xì)胞純度。3. 用 PBS 重懸細(xì)胞，細(xì)胞懸液用 70 μm 細(xì)胞篩網(wǎng)過濾后，計(jì)數(shù)。計(jì)數(shù)完成后，500 × g 離心 5 min，棄上清。注：細(xì)胞懸液需要過細(xì)胞篩網(wǎng)，以除去組織和細(xì)胞團(tuán)塊，否則會影響后續(xù)細(xì)胞分選純度。4. 用分選緩沖液重懸細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞密度為 1 × 108 cells/mL。5. 取 100 μL 細(xì)胞懸液 (1 × 107 個細(xì)胞）加入無菌流式管底部，再加入 2 μL Biotin-Antibody Mix，混勻后 4°C 孵育 10 min。注：a. 細(xì)胞懸液直接加入流式管底部，避免沿流式管管壁加入。b. 根據(jù)所使用磁性分離器不同也可使用離心管進(jìn)行細(xì)胞分選。c. 如果分選更多細(xì)胞，可按比例增加 Biotin-Antibody Mix 的用量。6. 磁珠準(zhǔn)備：充分重懸 Streptavidin Magnetic Beads，取 20 μL 至 1.5 mL EP管中，加入 1 mL 分選緩沖液，10,000 × g 離心 1 min，棄上清。重復(fù)洗滌磁珠 1 - 2 次，加 20 μL 分選緩沖液重懸磁珠。注：磁珠重懸分選緩沖液的用量與初始吸取磁珠體積需一致。7. 細(xì)胞-抗體孵育完成后，在流式管中加入 20 μL 清洗過的磁珠，混勻后 4°C 孵育 10 min。注：如果分選更多細(xì)胞，則按比例增加磁珠用量。例如分選 5 × 107個細(xì)胞，在 500 μL 細(xì)胞懸液中加入 10 μL Biotin-Antibody Mix 和 100 μL 磁珠。如果分選少于 1 × 107 個細(xì)胞，則將細(xì)胞懸液體積補(bǔ)至 100 μL，加入 2 μL Biotin-Antibody Mix和 20 μL 磁珠。8. 孵育完成后，在流式管中加入 2.5 mL 分選緩沖液，用移液器輕柔吹吸混勻（避免劇烈振蕩或者上下顛倒混勻）。9. 將含有細(xì)胞的分選流式管置于磁性分離器上，磁性分離 5 min。10. 將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至無菌離心管中（傾倒過程中流式管不可脫離磁性分離器），此細(xì)胞懸液中即包含純化的小鼠 CD4+ T 細(xì)胞，500 × g 離心 5 min。離心后棄上清，收集細(xì)胞。注：轉(zhuǎn)移過程中避免槍頭接觸磁珠，也可通過傾倒法收集細(xì)胞懸液。11. 根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要洗滌細(xì)胞，將細(xì)胞重懸于所需緩沖液或培養(yǎng)基中，即可用于后續(xù)分子生物學(xué)或細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。

注意事項(xiàng)：1. 抗體混合液使用和保存過程中均應(yīng)避免反復(fù)凍融、高速離心等操作。2. 建議選用低吸附移液器吸頭和離心管等耗材，避免因吸附造成磁珠和抗體的損耗。3. 磁珠在使用和保存過程中應(yīng)避免高速離心、干燥或凍存；磁珠禁止長時間置于磁場，否則會引起磁珠聚團(tuán)結(jié)塊，降低其結(jié)合活性。4. 從磁珠保存管中吸取磁珠前應(yīng)充分振蕩混勻，操作過程中動作應(yīng)輕柔，并避免產(chǎn)生氣泡。5. 本品需要與磁性分離器配套使用。6. 實(shí)驗(yàn)操作過程需輕柔，避免對細(xì)胞造成機(jī)械損傷。7. 本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品。8. 為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

銷售產(chǎn)品：Doxorubicin-SMCC  | SZL P1-41  | Harmine  | D-(+)-Trehalose  | Belotecan (hydrochloride)  | Utomilumab  | L-Cysteine  | Mibefradil (dihydrochloride)  | Nisin  | Isobutyl-deoxynyboquinone

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