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小鼠 CD4+ 細胞陽性分選試劑盒t

MCE 國際站：Mouse CD4+ Cell Positive Selection Kit

品牌：MedChemExpress (MCE)

存儲條件：4℃，2 年磁珠禁止凍結

簡介：MCE 小鼠 CD4+ 細胞陽性分選試劑盒可以從小鼠脾臟細胞、淋巴結或其它組織的單細胞懸液中分離出 CD4+ T 細胞。

概述：MCE 小鼠 CD4+ 細胞陽性分選試劑盒可以從小鼠脾臟細胞、淋巴結或其它組織的單細胞懸液中分離出 CD4+ T 細胞。原理為 CD4 Capture Antibody 可以對 CD4+ 細胞進行標記，再通過 Releasable Magnetic Beads 對目標細胞進行捕獲，最后用 Magnetic Beads Release Buffer 將磁珠從細胞表面解離，從而得到無磁珠標記的小鼠 CD4+ 細胞。MCE 小鼠 CD4+ 細胞陽性分選試劑盒操作簡單便攜，各成分對細胞均無毒性，且可實現高純度細胞分離的目的，分離的細胞可用于下游應用，例如流式細胞術、細胞培養、Western blot 分析、免疫沉淀、報告基因檢測或 DNA/RNA 提取等。MCE 小鼠 CD4+ 細胞陽性分選試劑盒具有如下優點：無需分離柱：使用磁性分離器即可實現目的細胞的快速分離；高純度：分選細胞純度可達 95% 以上；適用性廣：可直接用于目的細胞的捕獲，最終獲得細胞無磁珠標記

描述：

MCE 小鼠 CD4⁺ T 細胞正選試劑盒用于從小鼠脾細胞、淋巴結或其他組織的單細胞懸浮液中分離 CD4⁺ 細胞。其原理是 CD4 捕獲抗體可以標記 CD4⁺ 細胞，這些靶細胞被可釋放磁珠捕獲，最后磁珠釋放緩沖液將磁珠從細胞表面解離。此過程有效地促進了未用磁珠標記的小鼠 CD4⁺ 細胞的分選。

MCE 小鼠 CD4⁺ T 細胞正選試劑盒易于使用且便于攜帶，所含成分對細胞無毒。它能夠分離出高純度的細胞，所得細胞可用于各種下游應用。這些包括流式細胞術、細胞培養、蛋白質印跡分析、免疫沉淀（IP）、報告基因檢測和DNA / RNA提取。

MCE小鼠CD4 ⁺ T細胞正選試劑盒的特點

無需分離柱：使用磁分離器即可快速分離細胞，無需分離柱；

高純度：可獲得純度超過95％的分選細胞；

廣泛適用性：可直接用于目標細胞的捕獲，并且獲得的最終細胞不含磁珠標記。

操作說明：以分選小鼠脾臟CD4+ 細胞為例： 1. 制備小鼠脾臟單細胞懸液：在 70 μm 細胞篩網上研磨脾臟，以預冷的 PBS 沖洗細胞篩網，收集細胞懸液于 50 mL 離心管中，500 × g 離心 5 min，棄上清。2. 加入 5 mL 紅細胞裂解液 (ACK)，室溫裂解 5 min，再加入 20 mL PBS重懸細胞，500 × g 離心 5 min，棄上清。注：a. 紅細胞裂解步驟可根據所用裂解液的不同調整用量及時間。b. 少量紅細胞殘留不會影響后續分選及細胞純度。3. 用 PBS 重懸細胞，細胞懸液用 70 μm 細胞篩網過濾后，計數。計數完成后，500 × g 離心 5 min，棄上清。注：細胞懸液需要過細胞篩網，以除去組織和細胞團塊，否則會影響后續細胞分選純度。4. 用分選緩沖液重懸細胞，調整細胞密度為 1 × 108 cells/mL。5. 取 500 μL 細胞懸液 (5 × 107 個細胞）加入無菌流式管底部，再加入 10 μL CD4 Capture Antibody，混勻后 4°C 孵育 10 min。注：a. 細胞懸液直接加入流式管底部，避免沿流式管管壁加入。b. 根據所使用磁性分離器不同也可使用離心管進行細胞分選。c. 分選其他數量的細胞時可按比例調整 CD4 Capture Antibody的用量。如果分選少于 1 × 107 個細胞，則將細胞懸液體積補至 100 μL，加入 2 μL CD4 Capture Antibody。6. 磁珠準備：充分重懸 Releasable Magnetic Beads，取 100 μL 至 1.5 mL EP管中，加入 1 mL 分選緩沖液，10,000 × g 離心 1 min，棄上清。重復洗滌磁珠 1 - 2 次，加 100 μL 分選緩沖液重懸磁珠。注：磁珠重懸分選緩沖液的用量與初始吸取磁珠體積需一致。7. 細胞-抗體孵育完成后，在流式管中加入 100 μL 清洗過的磁珠，混勻后 4°C 孵育 10 min。注：分選其他數量的細胞時可按比例調整 Releasable Magnetic Beads 的用量。如果分選少于 1 × 107 個細胞，則 Releasable Magnetic Beads 的用量為20 μL。8. 孵育完成后，在流式管中加入 2 mL 分選緩沖液，用移液器輕柔吹吸混勻（避免劇烈振蕩或者上下顛倒混勻）。9. 將含有細胞的分選流式管置于磁性分離器上，磁性分離 5 min，棄上清。重復洗滌磁珠-細胞混合物 1 - 2 次。10. 將流式管從磁力架上取下，迅速加入 1 mL Magnetic Beads Release Buffer 重懸磁珠，避免磁珠干燥，將磁珠懸液轉移至 1.5 mL EP 管中，室溫旋轉孵育 10 min。注：分選其它數量細胞時可則按比例調整磁珠的用量。如果分選少于 1 × 107 個細胞，使用 200 μL Magnetic Beads Release Buffer 洗脫細胞。11. 孵育完成后，用移液器輕柔吹吸混勻（避免劇烈振蕩或者上下顛倒混勻），將磁珠懸液轉移至新的流式管中，置于磁性分離器上，磁性分離 5 min。12. 將上清液轉移至新的流式管中備用（上清液中含有目的細胞），迅速加入1 mL Magnetic Beads Release Buffer重懸磁珠，避免磁珠干燥，將磁珠懸液轉移至 1.5 mL EP 管中，室溫旋轉孵育 10 min。13. 孵育完成后，用移液器輕柔吹吸混勻（避免劇烈振蕩或者上下顛倒混勻），將磁珠懸液轉移至新的流式管中，置于磁性分離器上，磁性分離 5 min。14. 將上清液與第一次洗脫后的上清液混合，置于磁性分離器上，磁性分 5 min，去除殘留磁珠。15. 將上清液轉移至 EP 管中，500 × g 離心 5 min，棄上清，即可收集到無磁珠標記的CD4+細胞。16. 根據實驗需要洗滌細胞，將細胞重懸于所需緩沖液或培養基中，即可用于后續分子生物學或細胞生物學實驗

注意事項：1. 抗體混合液使用和保存過程中均應避免反復凍融、高速離心等操作。2. 建議選用低吸附移液器吸頭和離心管等耗材，避免因吸附造成磁珠和抗體的損耗。3. 磁珠在使用和保存過程中應避免高速離心、干燥或凍存；磁珠禁止長時間置于磁場，否則會引起磁珠聚團結塊，降低其結合活性。4. 從磁珠保存管中吸取磁珠前應充分振蕩混勻，操作過程中動作應輕柔，并避免產生氣泡。5. 本品需要與磁性分離器配套使用。6. 實驗操作過程需輕柔，避免對細胞造成機械損傷。7. 本產品僅限于專業人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品。8. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作

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