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NP-40 裂解液

MCE 國際站：NP-40 Lysis Buffer

品牌：MedChemExpress (MCE)

存儲條件： -20oC，1 年

簡介：MCE NP-40 Lysis Buffer 是一種比較溫和的細胞/組織裂解液，可用于動物、植物的細胞或組織及真菌、細菌樣品，經裂解得到的蛋白樣品可用于 PAGE、Western、IP、co-IP 和 ELISA 等實驗。

概述：NP-40 Lysis Buffer 是一種比較溫和的細胞/組織裂解液，可用于動物、植物的細胞或組織及真菌、細菌樣品，經裂解得到的蛋白樣品可用于 PAGE、WB、IP、Co-IP 和 ELISA 等相關實驗。溫和的裂解方法有利于維持原有的蛋白結構及蛋白間的相互作用。本產品的主要成分為 50 mM Tris (pH 7.4)、150 mM NaCl、1% NP-40 及 sodium pyrophosphate、β-glycerophosphate、sodium orthovanadate、sodium fluoride、EDTA、leupeptin 等，可有效防止蛋白降解。

描述：

MCE NP-40裂解液是一種比較溫和的裂解液，可用于動植物細胞或組織，也可用于真菌、細菌樣品，裂解得到的蛋白樣品可用于PAGE、WB、IP、Co-IP、ELISA等實驗等，溫和的裂解有利于保持蛋白原有的結構和原有的蛋白間相互作用。

NP-40裂解液含有50 mM Tris（pH 7.4）、150 mM NaCl、1% NP-40以及多種抑制劑如焦磷酸鈉、β-甘油磷酸鹽、釩酸鈉、氟化鈉、EDTA和亮抑酶肽等，能有效抑制蛋白降解。

操作說明：使用前需將本產品在室溫下充分融解并混勻，置于冰上備用。取適當量的裂解液，如有需要，在使用前數分鐘內加入蛋白酶/磷酸酶/蛋白激酶等相關抑制劑 Cocktail (相關產品見附件清單)，具體操作可參考相關產品說明書。1. 對于細胞樣品貼壁細胞1) 去除培養液，用預冷的 PBS、生理鹽水或無血清培養液清洗 1 次 (洗去血清中 IgG 干擾對 IP 和 Co-IP 實驗是有益的，但對 WB 可能并非必要；若血清中的蛋白沒有干擾，可不清洗)。2) 按照 6 孔板每孔加入 150-250 μL 裂解液的比例加入預冷的 NP-40 Lysis Buffer，用槍吹打數下，使裂解液和細胞充分接觸。注：通常裂解液接觸動物細胞 1-2 s 后，細胞就會被裂解。植物細胞宜在冰上裂解 2-10 min。3) 充分裂解后，10,000-14,000 g 離心 3-5 min，取上清，即可進行后續的 PAGE、WB 和 IP、Co-IP 等相關實驗。懸浮細胞1) 離心收集細胞，500 g，5 min，棄上清 (也可用預冷的 PBS、生理鹽水或無血清培養液洗 1 遍后再進行離心，棄上清)。輕輕渦旋或輕彈管底使細胞盡量分散開。2) 按照 6 孔板每孔加入 150-250 μL 裂解液的比例加入預冷的 NP-40 Lysis Buffer，輕彈管底以充分裂解細胞，此時應無明顯的細胞沉淀。注：若細胞量較多，建議將樣品分裝后裂解 (0.5-5 × 106 cells/管)。3) 充分裂解后，10,000-14,000 g 離心 3-5 min，取上清，即可進行后續的 PAGE、WB 和 IP、Co-IP 等相關實驗。細菌或酵母細胞為達到更好的裂解效果，細菌和酵母可先分別使用溶菌酶和破壁酶進行消化，然后再使用 NP-40 Lysis Buffer 進行裂解。1) 取 1 mL 菌液或酵母液，離心去上清 (也可用預冷的 PBS、生理鹽水或無血清培養液洗 1 遍后再進行離心，棄上清)。輕輕渦旋或輕彈管底以把細菌或酵母細胞盡量分散開。2) 加入 100-200 μL NP-40 Lysis Buffer，輕彈管底以充分裂解細胞，冰上裂解 2-10 min。3) 充分裂解后，10,000-14,000 g 離心 3-5 min，取上清，即可進行后續的 PAGE、WB 和 IP、Co-IP 等相關實驗。2. 對于組織樣品1) 將組織置于小皿中，冰上操作，剪切成細小的碎片。注：也可將組織樣品冷凍后使用液氮充分研磨后再加入 NP-40 Lysis Buffer 進行裂解。2) 按照每 20 mg 組織加入 150-250 μL 裂解液的比例加入預冷的 NP-40 Lysis Buffer。若裂解不充分可適當增加裂解液的用量；若需高濃度的蛋白樣品，可適當減少裂解液的用量3) 使用玻璃勻漿器勻漿。4) 充分裂解后，10,000-14,000 g 離心 3-5 min，取上清，即可進行后續的 PAGE、WB 和 IP、Co-IP 等實驗。注：a) 蛋白濃度因不同狀態的不同組織會有所不同。本實驗中，每 20 mg 凍存的小鼠肝臟組織用 200 μL NP-40 Lysis Buffer 裂解后獲得的上清，其蛋白濃度約為 15-25 mg/mL。b) 若組織樣品本身體積較小，可適當剪切后直接加入 NP-40 Lysis Buffer 進行裂解，經短暫渦旋后使樣品充分裂解，離心取上清，用于后續實驗。

注意事項：1. 本產品盡量避免反復凍融，可適當分裝后凍存使用。2 . 裂解樣品的所有步驟都需在冰上或 4oC 進行。3 . 該試劑盒中不包含蛋白酶/磷酸酶/蛋白激酶等相關抑制劑 Cocktail。4. 裂解液用量說明：不同細胞的裂解液用量不同。通常 6 孔板每孔細胞或 1 mL 菌液/酵母液加入 150 μL 裂解液即可。若細胞密度較高，可適當增加裂解液用量至 200-250 μL。通常，每 1 × 106 個動物細胞用 100 μL NP-40 Lysis Buffer 裂解后獲得的上清，其蛋白濃度約為 2-4 mg/mL。5. 關于裂解液的選擇，建議通過預實驗以摸索最佳裂解條件并裂解產品。如：對于一些特殊蛋白的 IP，若 WB 及 IP 中細胞裂解液裂解效果不太理想，可嘗試使用 RIPA 裂解液 (強、中或弱) 或 NP-40 Lysis Buffer。若 IP 的背景很高，即非特異的蛋白也被 IP 下來，或對于一些較難溶解蛋白的 WB，則需選用裂解強度較高的裂解液，如 RIPA 裂解液 (強)。若目的蛋白未被 IP 下來，則可能是裂解強度過強，可使用較為溫和的裂解液如 MCE NP-40 Lysis Buffer。6. 本產品含有較高濃度的去垢劑，后續蛋白濃度測定不宜用 Bradford 法，建議使用 BCA 法進行測定。7. 本產品僅限于專業人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品。8. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

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