哺乳動物活性蛋白抽提試劑
MCE 國際站：Mammalian Active Protein Extraction Reagent
品牌：MedChemExpress (MCE)
存儲條件：4°C ，2 年
簡介：MCE 哺乳動物活性蛋白抽提試劑選用溫和的非變性去垢劑 (detergent)，可用于快速、高質量、高活性提取哺乳動物細胞或組織的胞漿蛋白、細胞核蛋白以及膜蛋白。
概述：MCE 哺乳動物活性蛋白抽提試劑選用溫和的非變性去垢劑 (detergent)，可用于快速、高質量、高活性提取哺乳動物細胞或組織的胞漿蛋白、細胞核蛋白以及膜蛋白。MCE 哺乳動物活性蛋白抽提試劑具有如下優點?作用溫和：無需機械細胞裂解，產生的抽提物直接與考馬斯 (Bradford)、BCA 蛋白濃度檢測試劑盒或 SDS-PAGE 兼容；?兼容性強：抽提的可溶性蛋白處于非變性狀態，能較好地保持其原有的空間結構和生物學活性，可直接用于下游免疫分析、酶分析和其他親和純化實驗；維持活性：維持熒光素酶、β-半乳糖苷酶、CAT和其他報告基因的活性。
描述：
MCE哺乳動物活性蛋白提取試劑是一種溫和的、非變性洗滌劑，用于從哺乳動物細胞或組織中快速、高質量、高活性地提取細胞質、核和膜蛋白。
MCE哺乳動物活性蛋白提取試劑的特點
?溫和：所得提取物可立即用于考馬斯亮藍（Bradford）和BCA蛋白測定或SDS-PAGE；
?兼容：提取的可溶性蛋白質處于非變性狀態，能保持其原有的空間結構和生物活性，可直接用于免疫測定、酶分析和其他親和純化程序；
保持活性：保持熒光素酶、β-半乳糖苷酶、CAT和其他報告基因的活性。
操作說明：取適量MCE 哺乳動物活性蛋白抽提試劑并根據實驗目的選擇加入蛋白酶抑制劑 (MCE 產品目錄號：HY K0010，HY K0011) 和磷酸酶抑制劑 (MCE 產品目錄號：HY K0021)，置于冰上備用。貼壁細胞蛋白提取 (1) 細胞收集：小心去除細胞培養液。 (2) 細胞裂解：加入預冷哺乳動物活性蛋白抽提試劑，輕柔混勻，置于冰上孵育 2-10 min(3) 裂解液收集：收集裂解液并轉移至離心管中，4℃ 14,000 g 離心 5-10 min。 (4) 蛋白收獲：將上清液轉移至新離心管中用于后續檢測分析或置于 -80℃ 保存待用。注：a. 如果培養基中含有的酚紅或藥物影響后續蛋白分析可用 PBS 洗滌細胞 1-2 次，去除洗滌液后進行提取。 b. 可根據蛋白提取難易程度調整裂解孵育時間以獲得更多蛋白。懸浮細胞蛋白提取 (1) 細胞收集：將細胞懸浮液在 ?℃ ?,500 g 離心 10 min，棄上清液。 (2)細胞裂解：輕彈離心管底使細胞沉淀適當分散，加入適量 MCE 哺乳動物活性蛋白抽提試劑（用量見表 1），輕柔混勻，置于冰上孵育 ?2-10 min。 (3) 裂解液收集：?4℃ 1?4,000 g 離心 5-10 min。 (?4) 蛋白收獲：將上清液轉移至新離心管中用于后續檢測分析或置于 -80℃ 保存待用。注：a. 如果培養基中含有的酚紅或藥物影響后續蛋白分析可用 PBS 洗滌細胞 1-?2 次，去除洗滌液后進行提取。 b. 可根據蛋白提取難易程度調整裂解孵育時間以獲得更多蛋白。組織蛋白提取 (1) 組織預處理：將組織剪切成細小的碎片或用液氮冷凍后研磨成粉末。 (?2) 組織勻漿：按照 ?20 mg 組織：200-400 μL Extractron Reagent 的比例加入 MCE 哺乳動物活性蛋白抽提試劑，用玻璃勻漿器或組織勻漿儀研磨，使 其充分裂解，置于冰上孵育 ?-10 min。 (3) 勻漿收集：??4℃ 1?4,000 g 離心 5-10 min。 (?4) 蛋白收獲：將上清液轉移至新離心管中用于后續檢測分析或置于 -80℃ 保存待用。注：可根據組織類型的不同調整孵育時間，適當延長孵育時間可以提高蛋白得率。
注意事項：1. 蛋白提取的所有￠驟都必須在冰上或4 ?℃ 進行，以保證蛋白的活性2. 抽提 His 標簽重組蛋白如果后續用于鎳柱等蛋白純化，通常應避免加入含 EDTA 的試劑.3. 可以通過透析或超濾方法去除提取試劑中的去垢劑。4. 抽提試劑加入后細胞會開始裂解，出現的粘稠膠狀產品是正常的，可在抽提試劑中添加核酸酶降低粘稠度，也可增加抽提試劑用量。5. 蛋白收獲吸取上清時應避免接觸沉淀引入雜質蛋白。6. 可保留細胞裂解沉淀用于后續驗證分析。7. 本產品僅限于專業人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品。8. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
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