PolyFast 轉染試劑
MCE 國際站：PolyFast Transfection Reagent
品牌：MedChemExpress (MCE)
存儲條件： -20℃ 兩年避免反復凍融
簡介：MCE PolyFast Transfection Reagent 采用非脂質體陽離子聚合物為主要成分，可高效地對 DNA、RNA 進行轉染。
概述：MCE PolyFast 轉染試劑采用非脂質體陽離子聚合物為主要成分，適用于 DNA、RNA 的轉染。其具體原理為外源 DNA、RNA 可以與轉染試劑形成穩定復合物，通過胞吞作用進入細胞，隨后在胞質中釋放。PolyFast 轉染試劑對多種常見細胞具有高水平轉染效率，對原代細胞和難轉染細胞也具有較好的效果，高效低毒、操作簡便、重復性好
描述：
MCE PolyFast 轉染試劑由陽離子聚合物組成，可將核酸（DNA 或 RNA）引入真核細胞。在基于聚合物的轉染中，外源 DNA 與陽離子聚合物形成復合物，通過內吞作用進入宿主細胞。PolyFast 轉染試劑對許多細胞類型（包括一些難以轉染的細胞）具有高效、低毒的轉染效果。
操作說明：1. 準備待轉染細胞（以 6 孔板為例）1.1 提前一天接種細胞，至細胞密度達到 70-90% 進行細胞轉染。注：細胞狀態會極大影響轉染效率，待轉染細胞應處于良好生長狀態，建議使用生長處于指數期、存活率大于 90% 的細胞進行轉染。1.2 吸去原培養基，用 1× PBS 洗滌細胞 2-3 次，加入 900 μL 新鮮無血清培養基。2. 準備轉染試劑/DNA 復合物2.1 對 PolyFast 轉染試劑進行稀釋，對于待轉染 6 孔板中的每孔細胞，取 50 μL 無血清培養基與 3 μL PolyFast 轉染試劑混合，用槍輕輕吹打混勻，室溫反應 5 分鐘。2.2 參照表 1 對 DNA 進行稀釋，對于待轉染 6 孔板中的每孔細胞，取 50 μL 無血清培養基與 1 μg DNA 混合，用槍輕輕吹打混勻，室溫反應 5 分鐘。2.3 將上述稀釋好的 PolyFast 轉染試劑與 DNA 輕輕混勻，得到 PolyFast 轉染試劑/DNA 復合物，室溫孵育 15 分鐘。3. 加入 PolyFast 轉染試劑/DNA 復合物至細胞將上述 PolyFast 轉染試劑/DNA 復合物加入每孔細胞（復合物占每孔總體積約 1/10），輕輕混勻后于 37℃ 孵育 24-48 小時。必要時，可在轉染 6 小時后更換新鮮有血清培養基注：1） 通常情況下，DNA (μg) 和 PolyFast 轉染試劑 (μL) 的用量比例為 1:3。如有必要，可在 1:1-1:5 的范圍內調整以優化轉染效果。最佳轉染條件因不同的細胞類型和培養條件而有所區別，轉染前，可做預實驗摸索最佳轉染比例。2） RNA 轉染操作可參考 DNA 轉染方法進行。4. 分析轉染細胞轉染細胞培養 24-48 小時后，可根據實際情況用熒光檢測法、Western Blot、ELISA 等檢測轉染效果，或加入篩選藥物進行穩定細胞株的篩選
注意事項：1. 轉染時，應選用高純度、無菌、無污染的 DNA/RNA。2. 細胞狀態會極大影響轉染效率，待轉染細胞應處于良好生長狀態。3. 血清對 PolyFast 轉染試劑/DNA 復合物的形成有一定影響，建議用無血清培養基稀釋 PolyFast 轉染試劑和 DNA。4. 轉染過程中，抗生素的存在可能導致轉染效率降低及細胞毒性，不建議在轉染培養基中添加抗生素。5. 影響轉染效率的因素有很多，如細胞類型、細胞狀態及密度、DNA/RNA 質量及濃度、PolyFast 轉染試劑與 DNA/RNA 比例等，應根據具體實驗摸索最佳轉染條件。6. 本產品僅限于專業人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品。7. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
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