山li醇脫氫酶（sorbitol dehydrogenase，SH）試劑盒說明書

分光光度法 50 管/48 樣

正式測定前務(wù)必取 2-3 個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定測定意義：

SH（EC 1.1.1.14）催化山li醇脫氫生成果糖，是調(diào)控生物體內(nèi)山li醇含量的關(guān)健酶之一。

測定原理：

SH 催化山li醇脫氫生成果糖，同時還原 NAD⁺生成NADH，測定 340nm 吸光度增加速率可以計算 SH活性。

山li醇脫氫酶試劑盒   糖代謝系列-常備現(xiàn)貨

組成：

試劑二：粉劑×1 瓶，4℃保存；臨用前每瓶加入 15ml 蒸餾水，用不完的試劑仍 4℃保存。 試劑三：粉劑×1 瓶，-20℃保存；臨用前每瓶加入15ml 蒸餾水，用不完的試劑仍-20℃保存。

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)

自備儀器和用品：

紫外分光光度計、臺式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1ml 石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

粗酶液提取：

1、細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（10⁴ 個）：提取液體積（ml）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1ml 提取液），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）；8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。

2、組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1ml 提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。

3、血清（漿）樣品：直接檢測。

測定步驟：

1、分光光度計預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長至 340nm，蒸餾水調(diào)零。

2、樣本測定

混勻，37℃（哺乳動物）或 25℃（其它物種）準(zhǔn)確水浴 5min

將上述試劑按順序加入 1 ml 玻璃比色皿中，加樣本的同時開始計時，記錄 20 秒時的初始吸光度A1 和 2分 20 秒時的吸光度A2，計算ΔA=A2-A1。

SH 活性計算：

1、血清（漿）SH 活力的計算

單位的定義：每毫升血清（漿）每分鐘生成 1 nmol NADH 定義為一個酶活力單位。

SH（nmol/min/ml）= [ΔA×V 反總÷（ε×d）×10⁹]÷V 樣÷T=1688×ΔA 2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞中 SH 活力的計算:

（1） 按樣本蛋白濃度計算：

單位的定義：每mg 組織蛋白每分鐘生成 1 nmol NADH 定義為一個酶活力單位。

SH（nmol/min/mg prot）=[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10⁹]÷(V 樣×Cpr) ÷T=1688×ΔA÷Cpr

（2） 按樣本鮮重計算：

單位的定義：每g 組織每分鐘消耗 1 nmol NADH 定義為一個酶活力單位。

SH（nmol/min/g 鮮重）=[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10⁹]÷(W× V 樣÷V 樣總) ÷T=1688×ΔA÷W

（3） 按細(xì)菌或細(xì)胞密度計算：

單位的定義：每 1 萬個細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘生成 1 nmol NADH 定義為一個酶活力單位。

SH（nmol/min/10⁴ cell）=[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10⁹]÷(500×V 樣÷V 樣總) ÷T=3.376×ΔA

V 反總：反應(yīng)體系總體積，1.05×10^-3 L；ε：NADH 摩爾消光系數(shù)，6.22×10³ L / mol /cm；d：比色皿光徑， 1cm；V 樣：加入樣本體積，0.05 ml；V 樣總：加入提取液體積，1 ml；T：反應(yīng)時間，2 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g；500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，500 萬。

山li醇脫氫酶試劑盒   糖代謝系列-常備現(xiàn)貨