漆酶（Laccase）試劑盒說明書

分光光度法 50 管/24 樣

正式測定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定測定意義：

漆酶（CE1.10.3.2）是一種含銅的多酚氧化酶，屬于銅藍(lán)氧化酶家族，廣泛分布于真菌和高等植物中，

具有較強(qiáng)的氧化還原能力，在紙漿生物漂白，環(huán)境污染物降解和木質(zhì)纖維素降解以及生物檢測方面有非常廣泛的應(yīng)用。

測定原理：

漆酶分解底物ABTS 產(chǎn)生ABTS 自由基，在 420nm 處的吸光系數(shù)遠(yuǎn)大于底物ABTS，測定 ABTS 自由基的增加速率，可計(jì)算得漆酶活性。

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組成：

工作液：粉劑×1 瓶，4℃避光保存，臨用前加 25ml 試劑一溶解；用不完的試劑 4℃保存一周。

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)

需自備儀器和用品：

天平、低溫離心機(jī)、可見分光光度計(jì)、1 ml 玻璃比色皿、恒溫水浴鍋。

酶液提取：

1、組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1ml

提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。12000g 4℃離心 30min，取上清，置冰上待測。

2、細(xì)胞：按照細(xì)胞數(shù)量（104 個(gè)）：提取液體積（ml）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細(xì)胞加入

1ml 提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率 300w，超聲 3 秒，間隔 7 秒，總時(shí)間 3min）；然后 4℃，10000g

離心 10min，取上清置于冰上待測。

3、培養(yǎng)液：直接檢測。

測定步驟：

60℃水浴 20min 后冷卻至室溫，取上清液測定 420nm 處吸光值A，△A=A 測定管-A 對照管。

注意事項(xiàng)

1、極少數(shù)樣本在 60℃水浴 20min 后會出現(xiàn)沉淀，可經(jīng)過 8000g 25℃離心 10min 后，取上清檢測，例如成熟的水稻葉片樣本。

2、為確保檢測準(zhǔn)確性，若ΔA 大于 2，將樣本用提取液稀釋 2~10 倍后重新檢測，計(jì)算公式乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。

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